Для того чтобы правильно ответить на вопрос, необходимо вспомнить правила употребления предлогов времени в английском языке.
Предлог in используется с периодами времени (месяцами, временами года, годами, десятилетиями, веками, а также с частями дня, когда имеется в виду утро, день, вечер).
Предлог on используется с днями недели и датами.
Предлог by используется, когда речь идёт о крайнем сроке выполнения чего-либо или к какому-то моменту в будущем. Также предлог by может означать "рядом с" или "посредством".
Предлог at используется с точным временем (часами, минутами), а также с определёнными устойчивыми выражениями (например, at night).
В данном предложении необходимо употребить предлог at, так как указывается точное время отправления поезда.
Таким образом, предложение будет звучать так: "His train leaves at 7:30 in the morning."
Ответ: at